生化需氧量檢測(cè)是指微生物在有氧條件下分解水中某些可氧化物質(zhì)，特別是有機(jī)物所進(jìn)行的生化過(guò)程所消耗的溶解氧量。這個(gè)生化過(guò)程需要很長(zhǎng)時(shí)間，在20℃培養(yǎng)，需要100天才能完成這個(gè)過(guò)程。目前國(guó)內(nèi)外均采用20±1℃培養(yǎng)5天作為檢測(cè)指標(biāo)來(lái)測(cè)定水質(zhì)樣品培養(yǎng)前后溶解氧的差異。

今天我們的主要目的是讓大家了解生化需氧量（BOD）的檢測(cè)方法和意義，并掌握此類(lèi)方法的操作技巧。

生化需氧量的檢測(cè)設(shè)備

1、恒溫培養(yǎng)箱

2、5-20l薄口玻璃瓶

3、1000-2000ml量筒

4、玻璃攪拌棒：攪拌棒長(zhǎng)度應(yīng)比量筒高度長(zhǎng)200mm。在桿的底部固定有一塊直徑小于量筒底部并帶有若干小孔的硬橡膠板。

5、溶解氧瓶：250-300ml之間，帶磨砂玻璃塞，鐘形口密封供水。

6、虹吸管用于取水和加入稀釋水。

生化需氧量檢測(cè)所用試劑：

1、將8.5g磷酸二氫鉀（KH2PO3）、21.75g磷酸氫二鉀（K2HPO4）、33.4g七水磷酸氫二鈉（N2HPO4·7H2O）和1.7g氯化銨（NHC）溶解在此水中并稀釋pH值1000ml的溶液應(yīng)該是7。

2、硫酸鎂溶液

將225g七水硫酸鎂（MgSO·7H2O）溶于水中并稀釋至1000ml。

3、氯化鈣溶液

將27.5g無(wú)水氯化鈣溶于水中并稀釋至1000ml。

4、氯化鐵溶液

將0.25g六水氯化鐵（FeCl3·6H2O）溶于水中并稀釋至1000ml。

5、鹽酸溶液（0.5mol/L）

將40m鹽酸（=1.18g/m2）溶于水中并稀釋至1000ml。

6、氫氧化鈉溶液（0.5mol/L）

將20g氫氧化鈉溶于水中并稀釋至1000ml。

7、亞硫酸鈉溶液（1/2Na2SO2=0.025mol/L）

將1.575g亞硫酸鈉溶于水中并稀釋至1000ml。此解決方案不穩(wěn)定，需要每天準(zhǔn)備。

8、葡萄糖-谷氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液

葡萄糖（CH2O）和谷氨酸（HOOC--CH2CH2CHNH2-OOH）在103℃干燥1小時(shí)后，稱(chēng)取各150mg溶于水中，移入1000ml容量瓶中，稀釋至刻度，混勻。使用前準(zhǔn)備。

9、稀釋水

將一定量的水放入5-20L的玻璃瓶中，控制水溫在20℃左右。然后用無(wú)油空壓機(jī)或隔膜泵將吸入的空氣通過(guò)活性炭吸附管和水洗管，然后引入稀釋水中曝氣2-8小時(shí)，使溶解氧在稀釋水接近飽和。停止曝氣時(shí)也可通入適量的純氧。瓶蓋由兩層經(jīng)清洗和干燥的紗布制成，置于20℃的恒溫箱中數(shù)小時(shí)，使水中的溶解氧含量達(dá)到8mg/L左右。臨用前，每升水中加入1ml氯化鈣溶液、氯化鐵溶液、硫酸鎂溶液和磷酸鹽緩沖溶液，混合均勻。

稀釋水的pH值應(yīng)為7.2，BOD應(yīng)小于0.2mng/L

10、接種液

您可以選擇以下任何一種方法來(lái)獲得合適的接種物。

①城市污水，一般是生活污水，常溫放置一晝夜，取上清液備用。

②表層土壤提取液，取花園或植物生長(zhǎng)土100g，加水1L，混勻靜置10min，取上清液備用。

③使用含有城市污水的河水或湖水

④污水處理廠出水

⑤分析難降解物質(zhì)廢水時(shí)，取其排污口下游3~8km處的水樣作為廢水馴化接種物。如果沒(méi)有這樣的水源，可以用中和或適當(dāng)稀釋的廢水進(jìn)行連續(xù)曝氣，每天加入少量此類(lèi)廢水，并加入適量的地表土壤或生活污水，使微生物能夠繁殖。可以適應(yīng)這種廢水的繁殖。當(dāng)水中出現(xiàn)大量絮凝物，或檢測(cè)到化學(xué)需氧量的下降突然發(fā)生變化時(shí)，表明適用微生物已經(jīng)繁殖，可以用作接種物。一般馴化過(guò)程需要3-8d。

11、接種二稀釋水

取適量接種液，加入稀釋水中，混勻。每升稀釋水加入的接種量為：生活污水1～10ml；或20~30ml表土提取物；或10~100ml的河水和湖水。

接種稀釋水的pH值應(yīng)為7.2，BOD值應(yīng)在0.3～1.0mg/L之間。接種稀釋水配制后應(yīng)立即使用。

檢測(cè)水中生化需氧量：

1、未稀釋水樣的測(cè)定

（1）溶解氧含量高、有機(jī)物含量低的地表水可不經(jīng)稀釋直接虹吸，將20℃左右的混合水樣轉(zhuǎn)移到兩個(gè)溶解氧瓶中。注意轉(zhuǎn)移過(guò)程不要產(chǎn)生氣泡。用同樣的操作使兩個(gè)溶解氧瓶裝滿(mǎn)水樣并加塞后稍微溢出。瓶?jī)?nèi)不應(yīng)有氣泡。

（2）立即測(cè)量其中一個(gè)瓶子的溶解氧，另一個(gè)瓶子的口用水密封，然后放入培養(yǎng)箱中，在20+1℃下培養(yǎng)5天。栽培過(guò)程中注意加入密封水。從放入培養(yǎng)箱開(kāi)始算，五天五夜后，棄掉封水，測(cè)定剩余溶解氧。

2、稀釋水樣的測(cè)定

（1）稀釋倍數(shù)的確定：根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，提出如下計(jì)算方法，供稀釋時(shí)參考。

①地表水：由測(cè)得的高錳酸鹽指數(shù)與一定系數(shù)的乘積計(jì)算稀釋系數(shù)。

②工業(yè)廢水：用重鉻酸鉀法測(cè)定的COD值確定。通常需要三個(gè)稀釋比。使用稀釋水時(shí)，將COD值乘以系數(shù)0.075、0.15、0.225，即可得到三個(gè)稀釋倍數(shù)。使用接種稀釋水時(shí)，分別乘以0.075、0.15、0.25三個(gè)系數(shù)。

注：COD 測(cè)定時(shí)，在加熱回流60分鐘時(shí)，按照與COD測(cè)定相同的程序，用鄰苯二甲酸氫鉀溶液校準(zhǔn)試驗(yàn)制備的標(biāo)準(zhǔn)色柱估算COD值。

最后通過(guò)計(jì)算得到未經(jīng)稀釋的水樣的生化需氧量，此時(shí)培養(yǎng)水樣的生化需氧量已被稀釋。